三月份東南大學張同學在我司購買了小鼠干擾素系列試劑盒。他自我介紹是實驗新手,之前沒有做過ELISA等相關(guān)實驗。根據(jù)我司試劑盒提供的說明書操作2加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。咨詢怎樣確定合適血清的稀釋梯度?
我司根據(jù)張同學沒有做過相關(guān)實驗經(jīng)驗特此給客戶去提供了詳細的技術(shù)指導并通過我司銷售給以客戶文字答復。
現(xiàn)在實驗室普遍采用方陣滴定法。即取不同的抗原抗體梯度做交叉實驗,比如橫向包被抗原,豎向就用不同濃度抗體。抗原濃度范圍可以從500ng/孔開始逐步稀釋,抗體的開始稀釋倍數(shù)則要參考生產(chǎn)商的使用說明書. 血清用1%BSA稀釋,如果血清效價高,可以稀釋20000倍測定,一般都會做多個梯度,如稀釋1000,2000,4000,8000,16000倍。
恒遠預祝張老師實驗成功!